世界范围内监管层面首个！园区企业参与！
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近日，生物城企业至善唯新参与世界范围内监管层面首个AAV类标准物质的标定和分析超速离心法验证，加速了基因治疗药物的全球研发进程。
技术揭秘
在基因治疗领域，腺相关病毒(Adeno-associated virus，AAV)因其安全性高、免疫原性低、长期稳定表达等优点而成为基因治疗中最重要的载体之一。AAV载体已被广泛应用于基因治疗药物的开发，例如Glybera、Luxturna、Zolgensma、Roctavian、Upstaza、Hemgenix和Elevidys等。然而，严重甚至危及生命的不良事件一直令人担忧，特别是在AAV基因治疗中施用较高剂量(例如:1x1014vg/kg或更高)情况下。
AAV载体包含单链或互补DNA基因组，其包装过程中主要产生三种类型的颗粒:完整包装DNA片段的衣壳颗粒(full)、包装部分DNA片段的衣壳颗粒(partial)以及未包装DNA片段的衣壳颗粒(empty)。需要关注与基因治疗产品中的空病毒颗粒和部分包装病毒颗粒等，这些产品相关杂质可能会影响产品的纯度并增强产品的免疫原性，同时与完整的病毒颗粒竞争受体结合，从而抑制其转导效率，导致治疗剂量的增加。因此，对这些杂质的定量分析是至关重要的。此外，对空(empty)、部分(partial)和完整(full)病毒颗粒的连续监控有助于提升生产工艺的过程一致性。
在AAV颗粒的定量分析中，由于空病毒颗粒(empty)、部分包装病毒颗粒(partial)和完整病毒颗粒(full)之间的粒径差异微小，因此准确区分和量化这些颗粒面临诸多挑战。基于原始样品溶液、诺奖级分析超速离心法(AUC，Analytical Ultracentrifugation)可以准确区分和量化不同包装程度的AAV颗粒，被公认为空壳率检测的金标准。
在药品监管科学全国重点实验室的立项支持下，中国食品药品检定研究院重组药物室与至善唯新、信念医药、纽福斯、九天生物及贝克曼库尔特生命科学，首次系统地利用SV-AUC方法验证AAV空衣壳、部分包装AAV颗粒和完整AAV颗粒比例，包括特异性、精密度、准确性、线性等，以促进AAV基因治疗药物的质量控制。
研究团队建立了AAV空壳系统适用性标准品，该标准品为国际上各监管机构所推出的第一个AAV类标准物质。AAV空壳系统适用性标准品有助于其作为确定仪器性能的外部参考，从而加速基因治疗药物的全球研发进程。
研究结果与分析如下
专属性
HE样品、HF样品、空衣壳样品及空白对照溶液专属性确认
通过不同的方式，如电镜、empty和full峰在260和280nm下的响应差异(AUC UV-Vis光谱分析)、AUC 260/280nm比值，沉降系数范围及线性方程等，对HE(high percentage of empty capsid)样品、HF(high percentage of full capsid)样品、空衣壳样品不同组分进行了专属性确认(具体参见文末的参考文献)。
中间精密度实验
对HE和HF样品中间精密度实验进行验证
对HE和HF样本进行了三次重复性实验，包括六个平行样本、三天、两名分析师的实验设置。结果显示各组分的百分比和沉降系数的一致性与预期相符，相对标准偏差(RSD)在可接受范围内。
准确度实验
将空衣壳样品和HF样品按三种不同比例混合后进行SV-AUC实验，然后统计并计算各组分的回收率。
线性实验
线性实验结果
以AAV滴度为横坐标，并将每个峰的AUC吸光值(A值)作为纵坐标，生成线性图。HE样本中空颗粒、部分包装颗粒和完整颗粒的相关系数(R²)分别为0.9992、0.9985和0.9991，显示出显著的线性相关性。七个线性结果的C(s)分布图的叠加显示：随着滴度的降低，C(s)的信号值逐渐下降。
参数变量分析
通过轻微改变测试条件，探索了测试结果受影响的程度。本研究探索了温度、波长、样品池对齐、AUC样品检测回收后继续检测等。
AAV空壳系统适用性标准品标定
研究采用 SV-AUC法在多个实验室中联合标定了AAV空壳系统适用性标准品，以确保其准确性并确认系统适用性。系统适用性物质由中国食品药品检定研究院(NIFDC)分发给三个实验室和四名分析员。四次重复性实验的结果如图所示，总体百分比和沉降系数显示出良好的一致性。SV-AUC 是空壳率放行测试的候选方法，系统适用性标准品标定进一步完善了 QC “武器库“。
小结
本研究首次对AAV空壳率通过SV-AUC进行了系统的验证，为基因治疗产品空壳率分析提供了参考。
此外，建立了AAV空衣壳系统适用性标准品，该标准品为国际上各监管机构所推出的第一个AAV类标准物质。AAV空壳系统适用性标准品可成为确定仪器性能的外部参考，加速基因治疗药物的研究和开发。AAV空壳系统适用性标准品的建立，对于QC放行和促进AAV基因治疗的发展具有重要意义。该研究对于确保基因治疗药物的质量和安全性，以及加速其研发进程具有显著影响。
参考文献:Methodological validation of sedimentation velocity analytical ultracentrifugation method for Adeno-Associated Virus and collaborative calibration of system suitability substance.DOl: 10.1089/hum.2023.169.Epub ahead of print. PMID: 38717948.
Town主了解到，至善唯新是一家专注rAAV基因药物研发与颠覆式生产的国内基因治疗领军企业，是国内首家A、B两型血友病和法布雷原创基因新药均获批临床的创新型药企，是国内首个启动治疗法布雷病rAAV基因药物临床研究的公司。
公司在高效基因表达盒设计和载体优化方面拥有多项全球领先的专利与技术，公司的基因疗法治疗领域涵盖血液、中枢神经系统、代谢系统等多个临床适应症，部分管线有望成为基因疗法中best-in-class药物。
文章来源：至善唯新，成都天府国际生物城 该文章仅供分享，如有侵权请联系我们
- 展会介绍 -
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